药物分析常用的分析法|药物分析：常用定量分析法与应用——理化法

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（一） 重量法
根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。根据被测组分分离方法的不同，可分为提取法、挥发法、沉淀法。
1．提取法用适宜的溶剂提取出样品中的某种成分，再蒸去溶剂进行测定。例如胰酶中脂肪含量测定是用乙醚提取后挥散乙醚，残渣在105℃干燥2hr称重并计算。
2．挥发法是利用被测组分具有挥发性，或将它转化为挥发性物质来进行含量测定的方法。“炽灼残渣”为直接挥发法的一种特殊方式：“干燥失重”为间接挥发法。
3．沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘干或炽灼，最后称重并计算其含量的方法。
根据样品中某些成分与标准溶液能定量地发生酸碱中和、氧化还原或络合反应等进行测定。如胰酶的淀粉酶测定是利用氧化还原反应，以淀粉为底物，经淀粉酶水解后产生还原糖，在碱性溶液中还原糖又将斐林试剂中的cuz＋还原成cu＋，多余的cu＋在酸性溶液中与ki作用析出碘，然后用硫代硫酸纳滴定所析出的碘，来推算糖的含量，进而标定淀粉酶的效价。又如l盐酸精氨酸是用电位滴定法测定含量的。
（三）比色法
样品与显色剂可发生颜色反应，依颜色反应的强度测定含量。如蛋白质的含量测定，可利用蛋白质与双缩脲试剂发生颜色反应，而进行定量测定。硫酸软骨素的含量也是用比色法测定的，具体介绍如下。
本品系自猪的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织提取制得的酸性粘多糖。按干燥品计算，含氨基己糖以氨基葡萄糖计算，应不得少于24．0％。
本品采用elson-morgan色法测定含量，其基本原理为样品先用盐酸水解生成氨基己糖，然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应，生成色原物质，再与对二甲氨基苯甲醛反应产生红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测定。
对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0.1g，置l00ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置l00ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.1mg。
供试品溶液的制备取本品约0．15g，精密称定，置50ml量瓶中，加6mol／l盐酸液使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取5rrll置5oml量瓶中，密塞，置水浴中水解2h，取出放冷，用氢氧化钠溶液（1→5）中和至中性，加水至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃取初滤液，保留续滤液备用。
测定法精密量取对照品与供试品溶液各1ml，各取2份，分别置4支具塞试管中，各加水至5ml；另取具塞试管一支，加水5ml作为空白，各加乙酰丙酮试液 1ml，摇匀，置水浴中（1ml后密塞），准确加热25min，取出，用冰水迅速冷却后，加无醛乙醇3m1，在6o℃水浴中保温10min后，再加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，强力振摇，并继续在60℃水浴中保温1h，立即用冷水冷却至室温，照分光光度法，在525nm的波长处分别测定对照品溶液与供试品溶液的吸收度，以两份的平均值，按下式计算：
（计算公式）
式中互为供试品溶液吸收度的平均值，s为对照品溶液吸收度的平均值，ws为对照品溶液每lml中含盐酸氨基葡萄糖的量（mg），w为供试品重量（mg）， 0.8309为氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖分子量的比值。本法专属性强，操作简便、结果稳定。值得注意的是实验中所用乙醇必须是无醛乙醇。否则，将影响测定结果的准确性。
（四）紫外分光光度法
样品或转化后的产物在某一波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，其浓度与吸收度成正比，则可进行定量测定。如蛋白质在280nm左右有最大吸收，胰蛋白酶与底物n－乙酰－l酪氨酸乙酯作用后的产物在237nm处有最大吸收，根据其吸收度可进行定量。
（五）高效液相色谱法
高效液相色谱法（hplc）法的种类很多，应用也十分广泛，现将生化药物中常用的方法概述如下。
1．反相高效液相色谱法（rp－hplc）以（c4、c8、c18）烷基硅烷键合相为柱填料，以甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为检测手段，这种色谱体系在生化药物（例如肽类、氨基酸、蛋白质、多糖等）定量分析中应用广泛。例如：生白能（leucomax）的含量测定就是采用rp－hplc法。
本品系基因工程药物。它的活性成分为重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（γhugm·csf），是一种调节造血和白细胞功能所必须的蛋白质。含量测定方法如下。
磷酸缓冲液的配制：称取na2hpo43.55g，加水400ml，溶解后用稀磷酸调ph至7.0，加水至500ml，摇匀。
供试品及对照晶溶液的配制：精密称取供试品或对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配制成300μg／ml的溶液即可。

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